การใช้และข้อควรระวังของหลอดหมุนเหวี่ยงแบบอัลตราฟิลเตรชัน
1) เลือกหลอดอัลตราฟิลเตรชั่นที่เหมาะสมโปรดทราบว่าเมมเบรน UF แตกต่างกันในระดับความทนทานต่อสารเคมีต่างๆโดยทั่วไป หลอดอัลตราฟิลเตรชันที่มีจุดตัดน้ำหนักโมเลกุล 10 kDa สามารถเลือกได้ด้วยจุดตัดน้ำหนักโมเลกุลที่ไม่ควรมากกว่า 1/3 ของน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนที่สนใจ เช่น 35 kDaหากน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนที่สนใจอยู่ที่ประมาณ 10 kd สามารถใช้หลอดอัลตราฟิลเตรชันที่มีน้ำหนักโมเลกุลตัดเป็น 3 KD สามารถใช้ได้
(2) การกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันที่ซื้อใหม่จะแห้ง โดยเติมน้ำบริสุทธิ์พิเศษก่อนใช้งาน และน้ำจะไหลผ่านเมมเบรน อ่างน้ำแข็ง หรือตู้เย็น เพื่อทำให้เย็นลงล่วงหน้าเป็นเวลาสองสามนาทีจากนั้นจึงเทน้ำออก เช่น ของเหลวที่เป็นโปรตีน และเติมไปเท่าใด ขึ้นอยู่กับว่าเส้นสีขาวด้านบนสุดของหลอดเป็นอย่างไรการดำเนินการมีน้ำหนักเบา และต้องทำให้หลอดอัลตราฟิลเตรชันเย็นลงล่วงหน้าบนน้ำแข็งก่อนเติมสารละลายโปรตีน
3) ทั้งมวลและจุดศูนย์ถ่วงต้องถึงจุดสมดุลโปรดทราบว่าความเร็วการหมุนและความเร่งไม่เร็วมาก มิฉะนั้นจะสร้างความเสียหายโดยตรงต่อเมมเบรนกรองละเอียดการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันแบบแรงเหวี่ยงเริ่มต้นขึ้น (การปั่นแยกที่ถูกทำให้เย็นลงล่วงหน้าที่ 4 องศา)หลังจากแปลง RPM ของเครื่องหมุนเหวี่ยงต่างๆ เป็น g แล้ว ก็จะแตกต่างออกไปความเร่งของเครื่องหมุนเหวี่ยงถูกปรับให้เหลือน้อยที่สุด ซึ่งจะช่วยลดแรงกดบนเมมเบรนหมายเหตุ อย่าลืมทิ้งเครื่องหมุนเหวี่ยงไว้หลังจากที่เครื่องหมุนเหวี่ยงถึงความเร็วปลายทางแล้ว หรือหากคุณประสบปัญหา คุณจะไม่สามารถจัดการได้ในครั้งแรกการวางแนวของเมมเบรนกับสปินเดิลถูกปรับตามคำแนะนำ (กล่องเครื่องปั่นแยกเชิงมุมคือเมมเบรนกับแกนที่ตั้งฉากกัน)ในการใช้งานจริง ความเร็วในการหมุนโดยทั่วไปจะต่ำกว่าความเร็วในคำแนะนำ เพื่อให้สามารถยืดอายุของหลอดหมุนเหวี่ยงได้
3) ทั้งมวลและจุดศูนย์ถ่วงต้องถึงจุดสมดุลโปรดทราบว่าความเร็วการหมุนและความเร่งไม่เร็วมาก มิฉะนั้นจะสร้างความเสียหายโดยตรงต่อเมมเบรนกรองละเอียดการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันแบบแรงเหวี่ยงเริ่มต้นขึ้น (การปั่นแยกที่ถูกทำให้เย็นลงล่วงหน้าที่ 4 องศา)หลังจากแปลง RPM ของเครื่องหมุนเหวี่ยงต่างๆ เป็น g แล้ว ก็จะแตกต่างออกไปความเร่งของเครื่องหมุนเหวี่ยงถูกปรับให้เหลือน้อยที่สุด ซึ่งจะช่วยลดแรงกดบนเมมเบรนหมายเหตุ อย่าลืมทิ้งเครื่องหมุนเหวี่ยงไว้หลังจากที่เครื่องหมุนเหวี่ยงถึงความเร็วปลายทางแล้ว หรือหากคุณประสบปัญหา คุณจะไม่สามารถจัดการได้ในครั้งแรกการวางแนวของเมมเบรนกับสปินเดิลถูกปรับตามคำแนะนำ (กล่องเครื่องปั่นแยกเชิงมุมคือเมมเบรนกับแกนที่ตั้งฉากกัน)ในการใช้งานจริง ความเร็วในการหมุนโดยทั่วไปจะต่ำกว่าความเร็วในคำแนะนำ เพื่อให้สามารถยืดอายุของหลอดหมุนเหวี่ยงได้
(4) เมื่อทำให้ความเข้มข้นถึง 1 มิลลิลิตรที่เหลือ ให้นำสารละลายบัฟเฟอร์ 50 ไมโครลิตร เติมของเหลวที่ไหลผ่าน 10 ไมโครลิตร แล้วดูว่ามีสีน้ำเงินหรือไม่ เพื่อตัดสินว่าหลอดอัลตราฟิลเตรชันขาดโปรตีนหรือไม่หากท่อรั่ว ให้เทชั้นบนอีกครั้งและไหลผ่านเข้าไปในท่อใหม่เพื่อเริ่มการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชั่นเพื่อตัดสินอย่างแม่นยำว่าพลาดหลอดหรือไม่ ให้ปั่นแยกเป็นเวลา 10 นาทีด้วย BSA 5 มก. มล. ก่อนที่จะไหลผ่าน ใช้กาวโปรตีนหรือการทดสอบน้ำมันดิบของแบรดฟอร์ด และดำเนินการต่อโดยเติมสารละลายโปรตีนเข้มข้นที่เหลือ (ซึ่งทำงานบนน้ำแข็งและป้องกันไม่ให้โปรตีนได้รับความร้อน) จนกระทั่ง เพิ่มสมาธิทั้งหมดแล้วใช้ความระมัดระวังในระหว่างการปั่นเหวี่ยงหากเกิดการตกตะกอนของโปรตีนจนทำให้หลอดปิดหากเกิดการตกตะกอน ให้พิจารณาว่าสาเหตุเฉพาะของการตกตะกอนคือความเข้มข้นของโปรตีนมากเกินไปหรือมีบัฟเฟอร์ที่ไม่เหมาะสมแบบแรกสามารถแก้ไขได้โดยการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันของหลอดอัลตราฟิลเตรชันหลายหลอดพร้อมกัน การลดความเข้มข้น และแบบหลังโดยการแลกเปลี่ยนสารละลายบัฟเฟอร์ที่แตกต่างกันจนกระทั่งไม่มีการตกตะกอนของโปรตีนเกิดขึ้น
(4) เมื่อทำให้ความเข้มข้นถึง 1 มิลลิลิตรที่เหลือ ให้นำสารละลายบัฟเฟอร์ 50 ไมโครลิตร เติมของเหลวที่ไหลผ่าน 10 ไมโครลิตร แล้วดูว่ามีสีน้ำเงินหรือไม่ เพื่อตัดสินว่าหลอดอัลตราฟิลเตรชันขาดโปรตีนหรือไม่หากท่อรั่ว ให้เทชั้นบนอีกครั้งและไหลผ่านเข้าไปในท่อใหม่เพื่อเริ่มการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชั่นเพื่อตัดสินอย่างแม่นยำว่าพลาดหลอดหรือไม่ ให้ปั่นแยกเป็นเวลา 10 นาทีด้วย BSA 5 มก. มล. ก่อนที่จะไหลผ่าน ใช้กาวโปรตีนหรือการทดสอบน้ำมันดิบของแบรดฟอร์ด และดำเนินการต่อโดยเติมสารละลายโปรตีนเข้มข้นที่เหลือ (ซึ่งทำงานบนน้ำแข็งและป้องกันไม่ให้โปรตีนได้รับความร้อน) จนกระทั่ง เพิ่มสมาธิทั้งหมดแล้วใช้ความระมัดระวังในระหว่างการปั่นเหวี่ยงหากเกิดการตกตะกอนของโปรตีนจนทำให้หลอดปิดหากเกิดการตกตะกอน ให้พิจารณาว่าสาเหตุเฉพาะของการตกตะกอนคือความเข้มข้นของโปรตีนมากเกินไปหรือมีบัฟเฟอร์ที่ไม่เหมาะสมแบบแรกสามารถแก้ไขได้โดยการกรองแบบอัลตราฟิลเตรชันของหลอดอัลตราฟิลเตรชันหลายหลอดพร้อมกัน การลดความเข้มข้น และแบบหลังโดยการแลกเปลี่ยนสารละลายบัฟเฟอร์ที่แตกต่างกันจนกระทั่งไม่มีการตกตะกอนของโปรตีนเกิดขึ้น
(5) สองสามขั้นตอนแรกจะใช้เพื่อทำให้โปรตีนเข้มข้น และหากต้องเปลี่ยนบัฟเฟอร์ ให้ค่อยๆ เพิ่มบัฟเฟอร์ใหม่ (อัลตราฟิลเตรชันผ่านเมมเบรนอัลตราฟิลเตรชัน 0.22um) ให้เป็นโปรตีนทั้งหมดประมาณ 1 มิลลิลิตร และปรับความเข้มข้นใหม่เป็นประมาณ 1 มิลลิลิตรเป็นเวลาสามขั้นตอน ครั้งติดต่อกัน โดยมีปริมาตรสุดท้ายที่ทำให้เข้มข้นสุดท้าย ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของโปรตีนที่ต้องการ โดยทั่วไปไม่เกิน 500 ไมโครลิตร แต่ยังอยู่ภายใน 200 ไมโครลิตรด้วยบรรลุ 1,000 × หรือมากกว่านั้นสามครั้ง ซึ่งเท่ากับการเปลี่ยนแปลงบัฟเฟอร์ โดยคำนวณจากการเพิ่มระดับเสียงอย่างน้อย 10 × หรือประมาณนั้นในแต่ละครั้ง
(5) สองสามขั้นตอนแรกจะใช้เพื่อทำให้โปรตีนเข้มข้น และหากต้องเปลี่ยนบัฟเฟอร์ ให้ค่อยๆ เพิ่มบัฟเฟอร์ใหม่ (อัลตราฟิลเตรชันผ่านเมมเบรนอัลตราฟิลเตรชัน 0.22um) ให้เป็นโปรตีนทั้งหมดประมาณ 1 มิลลิลิตร และปรับความเข้มข้นใหม่เป็นประมาณ 1 มิลลิลิตรเป็นเวลาสามขั้นตอน ครั้งติดต่อกัน โดยมีปริมาตรสุดท้ายที่ทำให้เข้มข้นสุดท้าย ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของโปรตีนที่ต้องการ โดยทั่วไปไม่เกิน 500 ไมโครลิตร แต่ยังอยู่ภายใน 200 ไมโครลิตรด้วยบรรลุ 1,000 × หรือมากกว่านั้นสามครั้ง ซึ่งเท่ากับการเปลี่ยนแปลงบัฟเฟอร์ โดยคำนวณจากการเพิ่มระดับเสียงอย่างน้อย 10 × หรือประมาณนั้นในแต่ละครั้ง
เวลาโพสต์: Nov-09-2022