ขั้นตอนเฉพาะของการเพาะเลี้ยงเซลล์

1. อุปกรณ์ทั่วไป

1.อุปกรณ์ในห้องเตรียมการ

เครื่องกลั่นน้ำกลั่นเดี่ยว, เครื่องกลั่นน้ำกลั่นสองครั้ง, ถังเก็บกรด, เตาอบ, หม้ออัดความดัน, ตู้เก็บของ (จัดเก็บสิ่งของที่ยังไม่ผ่านการฆ่าเชื้อ), ตู้เก็บของ (จัดเก็บสิ่งของที่ผ่านการฆ่าเชื้อ), โต๊ะบรรจุภัณฑ์อุปกรณ์ในห้องเตรียมสารละลาย: สมดุลแรงบิดและเครื่องชั่งอิเล็กทรอนิกส์ (การชั่งน้ำหนักยา), เครื่องวัดค่า PH (การวัดค่า PH ของสารละลายเพาะเลี้ยง), เครื่องกวนแม่เหล็ก (การกำหนดค่าห้องสารละลายเพื่อกวนสารละลาย)

2.อุปกรณ์ห้องเพาะเลี้ยง

ถังไนโตรเจนเหลว ตู้เก็บของ (เก็บของจิปาถะ) หลอดฟลูออเรสเซนต์และหลอดอัลตราไวโอเลต ระบบเครื่องฟอกอากาศ ตู้เย็นอุณหภูมิต่ำ (- 80 ℃) เครื่องปรับอากาศ ถังคาร์บอนไดออกไซด์ โต๊ะข้าง (บันทึกการทดสอบการเขียน)

3.อุปกรณ์ที่ต้องวางในห้องปลอดเชื้อ

เครื่องหมุนเหวี่ยง (รวบรวมเซลล์), โต๊ะทำงานที่สะอาดเป็นพิเศษ, กล้องจุลทรรศน์แบบกลับด้าน, ตู้อบ CO2 (การเพาะเลี้ยง), อ่างน้ำ, เครื่องฆ่าเชื้อและฆ่าเชื้อด้วยออกซิเจนสามออกซิเจน, ตู้เย็น 4 ℃ (วางเซรั่มและสารละลายเพาะเลี้ยง)

2、 การดำเนินการปลอดเชื้อ

(1) การฆ่าเชื้อในห้องปลอดเชื้อ

1. ทำความสะอาดห้องปลอดเชื้อเป็นประจำ สัปดาห์ละครั้ง ขั้นแรกใช้น้ำประปาถูพื้น เช็ดโต๊ะ และทำความสะอาดโต๊ะทำงาน จากนั้นใช้ไลโซลหรือโบรโมเจอรามีน 3 ‰ หรือกรดพาราซิติก 0.5% เช็ด

2. การฆ่าเชื้อตู้อบ CO2 (ตู้ฟัก): ขั้นแรกเช็ดด้วยโบรโมเจอรามีน 3 ‰ จากนั้นเช็ดด้วยแอลกอฮอล์ 75% หรือกรดพาราซิติก 0.5% จากนั้นฉายรังสีด้วยหลอดอัลตราไวโอเลต

3. การฆ่าเชื้อก่อนการทดลอง: เปิดหลอดอัลตราไวโอเลต เครื่องฆ่าเชื้อแบบสามออกซิเจน และระบบเครื่องฟอกอากาศ เป็นเวลา 20-30 นาทีตามลำดับ

4. การฆ่าเชื้อหลังการทดลอง: เช็ดโต๊ะ โต๊ะข้าง และเวทีกล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัวด้วยแอลกอฮอล์ 75% (3 ‰ โบรโมเจอรามีน) ที่สะอาดเป็นพิเศษ

การเตรียมการฆ่าเชื้อของบุคลากรในห้องปฏิบัติการ

1. ล้างมือด้วยสบู่

2. สวมเสื้อผ้าแยก หมวก หน้ากาก และรองเท้าแตะ

3. เช็ดมือด้วยสำลีแอลกอฮอล์ 75%

สาธิตการทำงานแบบปลอดเชื้อ

1. ขวดแอลกอฮอล์, PBS, อาหารเลี้ยงเชื้อ และทริปซินทุกขวดที่นำเข้ามาบนโต๊ะที่สะอาดเป็นพิเศษ ควรเช็ดด้วยแอลกอฮอล์ 75% ที่พื้นผิวด้านนอกของขวด

2. ทำงานใกล้เปลวไฟของตะเกียงแอลกอฮอล์

3. อุปกรณ์ต้องผ่านการฆ่าเชื้อก่อนใช้งาน

4. อุปกรณ์ต่างๆ (เช่น ฝาขวดและหยด) ที่ใช้ต่อไปควรวางไว้ในที่สูง และควรมีความร้อนสูงเกินไประหว่างการใช้งาน

5. การทำงานทั้งหมดควรอยู่ใกล้กับตะเกียงแอลกอฮอล์ และการกระทำควรเบาและแม่นยำ และไม่ควรสัมผัสแบบสุ่มหากหลอดไม่สามารถสัมผัสกับถังบำบัดน้ำเสียได้

6. เมื่อดูดของเหลวมากกว่าสองชนิด ให้ใส่ใจกับการเปลี่ยนท่อดูดเพื่อป้องกันการปนเปื้อนข้าม

ดูบทถัดไปเกี่ยวกับการฆ่าเชื้อเครื่องมือ